总抗氧化状态（TAS）检测试剂盒（微量法）

注意：各组分（小管试剂）开盖前，请先低速离心。

液体试剂均为即用型。

阳性对照：加入1mL提取液来溶解，混匀得到母液。然后取0.1mL母液加到0.9mL提取液中混匀。浓度是 0.1mg/mL，4℃保存。

工作液的配制：临用前配制，将试剂一、试剂二、试剂三按 10:1:1 的比例混合，现配现用。

动物组织：称取0.1g样本，加入1mL 提取液，冰浴匀浆，转移到1.5mL EP管中，10,000g，4℃离心10min，取上清液于新离心管中，置冰上检测。

植物组织：称取0.1g样本，加入1mL提取液捣碎，冰浴超声波破碎 5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），转移到1.5mL EP管中，10,000g，4℃ 离心10min，取上清液于新离心管中，置冰上检测。

细胞或细菌：收集500万细胞或细菌到离心管内，用冷PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入1mL提取液，冰浴超声波破碎5min（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，重复30次），转移到1.5mL EP管中，10,000g，4℃ 离心10min，取上清液于新离心管中，置冰上检测。

血清、血浆或尿样：直接检测。

注意：1. 推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存1个月。

2. 不能用EDTA作为血浆样品的抗凝剂。样品中也不能含有DTT、巯基乙醇、Tween、Triton和NP-40等去垢剂和DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。

3. 如需测定蛋白浓度，推荐使用BCA法蛋白质定量试剂盒进行样本蛋白质浓度测定。

1. 酶标仪或可见光分光光度计预热30min以上，调节波长到593nm，可见光分光光度计去离子水调零。

2. 样本测定（在96孔板或微量玻璃比色皿中依次加入下列试剂）：

3. 充分混匀，室温反应5min，于593nm测定吸光值，计算ΔA测=A测定-A空白（空白孔只需做1 个）

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验，如果A测定大于1.5，样本可用提取液进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数。

1.总抗氧化能力计算标准曲线公式： y=4.4664x+0.0685，R2 = 0.9986，其中y为Fe2+终浓度(μmol/mL)，x为吸光值差值ΔA， 将ΔA测带入标准曲线公式，求得y(μmol/mL)。

2.样本中TAS计算：

单位定义：样本的抗氧化能力以达到同样吸光度变化值（ΔA）所需的标准液Fe2+离子浓度（μmol/mL）表示。

（1）按样本鲜重计算

TAS（μmol/g 鲜重）=y×V样÷(V样÷V样总×W)×n=y÷W×n 

（2）按样本蛋白浓度计算

TAS（μmol/mg prot）=y×V样÷(V样×Cpr)×n=y÷Cpr×n

（3）按细胞或细胞数量计算

TAS（μmol/104 cells）=y×V样÷(V样÷V样总×细胞数量)×n=y÷细胞数量×n

（4）按液体体积计算

TAS（μmol/mL）=y×V样÷V样×n=y×n

V样：反应中样品体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；W：样品质量，g；n：样本稀释倍数；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；细胞数量：以 104为单位。